hLKB1基因重组质粒构建及蛋白表达和定位

作     者：解晓晨 郭启强 池志宏 XIE Xiao-chen;GUO Qi-qiang;CHI Zhi-hong

作者机构：中国医科大学基础医学院病理生理教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室辽宁沈阳110001 

出 版 物：《解剖科学进展》 (Progress of Anatomical Sciences)

年 卷 期：2012年第18卷第4期

页      面：320-322页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然基金资助项目(NSFC-81170561) 

主　　题：LKB1基因 融合蛋白 蛋白质印迹 免疫荧光 胃癌SGC-7901 

摘      要：目的构建hLKB1真核表达载体,证实融合蛋白在胃癌细胞内的表达及定位。方法提取胃正常黏膜上皮细胞GES-1的总mRNA并进行反转录。以反转录的cDNA为模板PCR扩增hLKB1全长编码基因,克隆至pCDNA3.1/flag的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到胃癌SGC-7901细胞中,分别利用Western blot和激光共聚焦扫描显微技术检测其表达和在胃癌细胞中的定位。结果 hLKB1全长基因序列克隆到真核表达载体中,酶切鉴定片段为1300bp。Western blot检测到真核转染的Flag-hLKB1在胃癌SGC-7901细胞表达,条带约为50kD,免疫荧光显示蛋白广泛定位于细胞质和细胞核内。结论成功构建了hLKB1基因真核表达载体,并验证其在胃癌细胞表达。