乳腺癌细胞中PELP1基因表达与启动子区CpG岛甲基化相关性

作     者：王麟 齐佳昕 张金波 张艳枝 王鹏 王晓艳 梁松鹤 欧芹 

作者机构：哈尔滨医科大学大庆校区病理生理学教研室大庆163319 哈尔滨医科大学附属第五医院心内科大庆163319 哈尔滨医科大学大庆校区生理学教研室大庆163319 哈尔滨医科大学大庆校区临床检验教研室大庆163319 佳木斯大学生化与分子生物学教研室佳木斯154007 

出 版 物：《解剖科学进展》 (Progress of Anatomical Sciences)

年 卷 期：2015年第21卷第4期

页      面：375-378,382页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：黑龙江省教育厅科学技术研究基金项目(No.12521237) 

主　　题：乳腺癌 脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1 表观遗传学 甲基化特异性PCR 

摘      要：目的建立针对PELP1基因启动子区CpG岛的甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)检测方法,分析乳腺癌细胞中PELP1基因表达与启动区CpG岛甲基化的相关性。方法设计针对PELP1基因启动子区的MSP引物组,以甲基化和非甲基化DNA为模板验证MSP引物的特异性,建立针对PELP1基因启动子区的MSP检测方法。以DNA甲基转移酶抑制剂5 -氮杂-脱氧胞苷磷酸(5 -Aza-d C)分别处理MCF-7乳腺癌细胞、MCF-10正常乳腺导管上皮细胞,采用MSP检测PELP1基因启动子区甲基化状态变化,采用Western blot检测蛋白表达。结果针对PELP1基因启动子区设计的MSP引物组特异性良好,甲基化特异性引物仅在甲基化DNA模板获得阳性扩增条带,非甲基化引物仅在非甲基化DNA模板获得阳性条带。MCF-7乳腺癌细胞中PELP1基因启动子区呈非甲基化状态,MCF-10正常乳腺导管上皮细胞中PELP1基因启动子区呈甲基化状态,MCF-10细胞中PELP1蛋白表达水平为MCF-7细胞的1/16(P0.05)。采用5 -Aza-dC去除MCF-10细胞PELP1基因启动子区甲基化后,PELP1蛋白表达水平上升了9.7倍(P0.05)。结论所建立的PELP1基因启动子区MSP检测方法特异性良好,去甲基化可能是导致乳腺癌细胞中PELP1基因过表达的重要机制。