猪细小病毒SY-99株非结构蛋白NS1基因的克隆与原核表达

作     者：吴丹 童光志 仇华吉 薛强 周艳君 李景鹏 

作者机构：东北农业大学生物工程系 哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 哈尔滨150001 哈尔滨150030 

出 版 物：《中国农业科学》 (Scientia Agricultura Sinica)

年 卷 期：2003年第36卷第11期

页      面：1352-1356页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：猪细小病毒 NS1 

摘      要：根据猪细小病毒 (porcineparvovirus ,PPV)NADL 2株非结构蛋白基因NS1序列设计引物 ,扩增出了PPVSY 99株的NS1基因 ,将其克隆到原核表达载体pET2 8a中 ,得到重组质粒SYNS1/pET2 8a。将SYNS1/pET2 8a转化到大肠杆菌BL2 1(DE3)中 ,经IPTG诱导 ,使PPVNS1基因获得了表达 ,运用ELISA和Westernblotting证实了表达产物的特异性。经表达产物细胞定位分析 ,表达的NS1蛋白是以包涵体的形式存在于大肠杆菌中。通过改变诱导时间或诱导剂IPTG的浓度 ,确定了表达NS1蛋白的最佳诱导条件 :IPTG终浓度为 0 .6mmol·L-1,诱导时间为 3h ,在大肠杆菌中最高表达含量为 17.8%。亲和层析后 ,得到了纯化的NS1蛋白 ,在Westernblotting检测中 ,纯化蛋白大大降低了反应背景。表达的NS1蛋白可作为免疫诊断试剂来检测PPV的发生 ,而且还可用于鉴别灭活疫苗免疫猪和自然感染猪