hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位

作     者：蔡鑫泽 顾卉 刘彤 李丰 CAI Xin-ze;GU Hui;LIU Tong;LI Feng

作者机构：中国医科大学附属第一医院中心实验室 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 

出 版 物：《中国医科大学学报》 (Journal of China Medical University)

年 卷 期：2009年第38卷第11期

页      面：816-819页

核心收录：

学科分类：10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30771128) 

主　　题：hLMO1基因 质粒构建 基因表达与定位 

摘      要：目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO1在HEK293细胞内的定位。结果hLMO1基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为471bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为45kDa。pEGFR-LMO1在人HEK293细胞核与细胞质均有表达。结论成功构建了hLMO1基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO1蛋白定位于HEK293细胞的细胞质和细胞核内。