人干燥综合征B抗原的基因克隆及融合表达

作     者：杨湘越 兰小鹏 钟智强 朱忠勇 YANG Xiang-yue;LAN Xiao-peng;ZHONG Zhi-qiang;ZHU Zhong-yong

作者机构：南京军区福州总医院解放军医学检验中心福建福州350025 

出 版 物：《医学研究生学报》 (Journal of Medical Postgraduates)

年 卷 期：2006年第19卷第3期

页      面：202-204,209页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：福建省青年人才科技创新基金资助项目(批准号:2002J060) 

主　　题：人干燥综合征B抗原 基因克隆 融合表达 

摘      要：目的:建立新的检测方法,克隆并表达人干燥综合征B抗原(SS-B)。方法:应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,从HL-60细胞株中克隆SS-B全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在IPTG诱导下表达,产物行十二烷基硫酸钠-多丙烯酰胺冻胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(W estern b lot)试验。结果:PCR产物约为1 200 bp,与预期1 224 bp接近,测序结果与Gen-Bank报道的完全一致。pGEX-5T-SS-B重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和W estern b lot结果显示融合蛋白相对分子质量为71 000,具有天然SS-B的免疫原性。结论:成功克隆表达SS-B,为下一步研究奠定了基础。