腺相关病毒介导的人血管内皮生长因子体外转染兔骨髓内皮祖细胞

作     者：陈锋 谭最 董长垣 陈晓 郭淑芳 CHEN Feng;TAN Zui;DONG Changyuan;CHEN Xiao;GUO Shufang

作者机构：武汉大学中南医院血管外科湖北武汉430071 武汉大学医学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430071 

出 版 物：《武汉大学学报（医学版）》 (Medical Journal of Wuhan University)

年 卷 期：2007年第28卷第5期

页      面：556-559,563,F0003页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071009[理学-细胞生物学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:30271265) 

主　　题：腺相关病毒 内皮祖细胞 血管内皮生长因子 β-半乳糖苷酶 

摘      要：目的:探讨腺相关病毒-2(AAV-2)介导人血管内皮生长因子-165(hVEGF165)转染兔骨髓内皮祖细胞(EPCs)及其对EPCs增殖能力的影响。方法:构建携带hVEGF165基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体pAAV-hVEGF165;制备携带hVEGF165基因的rAAV(rAAV-2-hVEGF165)和携带β-半乳糖苷酶(-βgal)基因的rAAV(rAAV-2-LacZ);体外培养和鉴定兔骨髓EPCs;分别用rAAV-2-hVEGF165和rAAV-2-LacZ体外转染EPCs(AAV/VEGF-EPC和AAV/LacZ-EPC);用RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术等法检测hVEGF165和-βgal的表达,MTT法检测AAV/VEGF-EPC的增殖能力。结果:经酶切鉴定和DNA测序,得到了序列正确的重组质粒pAAV-hVEGF165;AAV/VEGF-EPC能够表达hVEGF165蛋白,AAV/LacZ-EPC能够表达-βgal;rAAV-2-hVEGF165对于EPCs的转染率为64.4%;AAV/VEGF-EPC的增殖能力明显强于AAV/LacZ-EPC和EPCs。结论:EPCs可以被rAAV-2-hVEGF165高效转染,其增殖能力明显增强。本文为进一步探讨AAV/VEGF-EPC用于缺血性血管疾病治疗的可能性奠定了基础。