鸭瘟病毒gB蛋白N端主要抗原域的表达及间接ELISA检测

作     者：潘华奇 曹瑞兵 刘磊 孙海亮 姬向波 陈勇军 陈溥言 Huaqi Pan;Ruibing Cao;Lei Liu;Hailiang Sun;Xiangbo Ji;Yongjun Chen;Puyan Chen

作者机构：南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 甘肃农业大学动物医学院兰州730070 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2008年第48卷第1期

页      面：98-102页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：鸭瘟病毒 gB蛋白 原核表达 抗原域 间接ELISA 

摘      要：在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRⅠ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了DPVgB蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用His·Bind亲和层析柱纯化重组DPVgB蛋白,以纯化的重组gB1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测鸭瘟病毒抗体的igB1-ELISA。结果表明,抗原的最佳包被浓度为6.5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD4900.4,且待检血清OD490/阴性血清OD4902。应用igB1-ELISA对鸭血清样品进行检测,结果表明igB1-ELISA与全病毒包被的iDPV-ELISA符合率达到95.6%。