幽门螺杆菌重组vacA-CtxB蛋白的原核表达及免疫学研究

作     者：张任飞 杨致邦 马永能 潘淑 张婧 ZHANG Ren-fei;YANG Zhi-bang;MA Yong-neng;PAN Shu;ZHANG Jing

作者机构：绵阳市第三人民医院检验科四川绵阳621000 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016 

出 版 物：《中国微生态学杂志》 (Chinese Journal of Microecology)

年 卷 期：2015年第27卷第11期

页      面：1272-1275页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：四川省卫生厅课题(120316) 

主　　题：幽门螺杆菌 细胞空泡毒素 霍乱毒素B亚单位 原核表达 口服疫苗 

摘      要：目的原核表达幽门螺杆菌pQE-vctB(含***细胞空泡毒素毒性片段与霍乱毒素B亚单位的融合基因)在*** DH5α中诱导表达,以获得重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性,为制备防治***感染的口服疫苗奠定基础。方法 (1)pQE-vctB转化*** DH5α,IPTG诱导表达重组蛋白VCTB,Western blot分析抗原性,镍离子柱纯化。(2)重组蛋白VCTB口服免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性IgG、小肠冲洗液IgA,以鉴定其免疫原性。结果重组蛋白VCTB经SDS-PAGE分析相对分子量(Mr)约为40kD,亲和层析后可获得纯度为92%以上的蛋白。Western blot分析显示能与VacA抗血清反应。ELISA检测显示,免疫小鼠的血清特异性抗体IgG,肠粘液IgA显著高于VacA对照组(P0.01)。结论 vacA和ctxB融合基因原核表达质粒转化*** DH5α表达菌获得了重组蛋白VCTB,表达量较高,纯度较高,有良好的抗原性和免疫原性,口服免疫小鼠可明显提高其免疫效果,产生较高水平的IgA,可用于制备防治***感染的口服疫苗。