应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究

作     者：钟彦伟 成军 郭风劲 曲建慧 纪冬 程勇前 李晓东 郭江 戴久增 王琳 徐东平 ZHONG Yan-wei;CHENG Jun;GUO Feng-jin;QU Jian-hui;JI Dong;CHENG Yong-qian;LI Xiao-dong;GUO Jiang;DAI Jiu-zeng;WANG Lin;XU Dong-ping

作者机构：解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所 重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2006年第20卷第4期

页      面：343-345页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主　　题：酵母菌 杂交 干扰素β 结合蛋白 

摘      要：目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析。结果应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白。初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用。结论应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白。