食管癌相关基因1在甲醇酵母中的表达与纯化

作     者：赵念玺 郭黎萍 陆士新 

作者机构：中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所癌变与病因研究室北京市100021 

出 版 物：《医学分子生物学杂志》 (Journal of Medical Molecular Biology)

年 卷 期：2005年第2卷第1期

页      面：5-9页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2002CB5130101) 英国科协资助(No.142291) 

主　　题：甲醇酵母 食管癌相关基因1 分泌表达 

摘      要：目的为获得食管癌相关基因1(ECRG1)编码的活性蛋白,利用甲醇酵母系统表达ECRG1。方法将本研究室构建的PCDNA6-HA-ECRG1重组到分泌表达载体pPIC9k中,然后转入酵母GS115,通过G418筛选,在甲醇的诱导下,获得表达的蛋白。结果成功构建了分泌表达重组体pPIC9k-ECRG1,并转入了GS115,筛到抗2.5mg/ml G418的重组菌株,在甲醇的诱导下,ECRG1蛋白得到了分泌表达,发酵培养获得的融合蛋白经镍离子亲和层析,得到纯度80%左右的蛋白。结论用酵母表达系统得到了活性蛋白,可用于进一步的生物功能及作用机理的研究,也为今后研究基因-蛋白的功能与结构,提供了分离和纯化蛋白的重要方法。