猪链球菌2型溶血素成熟蛋白的原核表达及其生物学特性与免疫保护性

作     者：倪艳秀 何孔旺 周俊明 汪伟 吕立新 俞正玉 茅爱华 温立斌 张雪寒 李彬 胡屹屹 郭容利 王小敏 陆承平 

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 

出 版 物：《江苏农业学报》 (Jiangsu Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2013年第29卷第2期

页      面：335-340页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31072155) 江苏省自然科学基金重点项目(BK2010068) 江苏省农业科技自主创新探索性研究项目[CX(11)4040] 

主　　题：猪链球菌2型 溶血素成熟蛋白 原核表达 生物学特性 免疫保护性 

摘      要：根据猪链球菌2型溶血素(SLY)的基因序列设计引物,以江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增除信号肽序列外的溶血素成熟蛋白基因,并克隆到表达载体pET-32α(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经1 mmol/L IPTG诱导,在37℃下4 h时表达产物(分子量约为7.2×104)达到高峰,表达量约占菌体总蛋白质的20%,表达产物在上清和包涵体中各占一半。将上清经镍柱亲和层析纯化,纯化蛋白质经Western blotting鉴定呈阳性,对绵羊红细胞、鸡红细胞的溶血效价分别为1.707×105HU/mg、4.267×104HU/mg,并可引起HEp-2和Vero细胞的颗粒增多、圆缩和脱落。纯化蛋白质对BALB/c小鼠的免疫保护率为83.3%(5/6)。这为进一步研究SLY致病机理和研制猪链球菌新型疫苗奠定了基础。