H-2K^d基因siRNA表达质粒的构建及在小鼠LAK细胞的表达

作     者：庄学伟 夏西燕 单宁宁 王洪春 张义 杨晓静 李晓丽 赵胜梅 邹雄 ZHUANG Xue-wei;XIA xi-yan;SHAN Ning-ning;WANG Hong-chun;ZHANG Yi;YANG Xiao-jing;LI Xiao-li;ZHAO Sheng-mei;ZOU Xiong

作者机构：山东大学齐鲁医院检验科济南250012 山东省济南市卫生学校免疫学教研室济南250022 

出 版 物：《山东大学学报（医学版）》 (Journal of Shandong University:Health Sciences)

年 卷 期：2008年第46卷第6期

页      面：590-593页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：山东省科技厅重点项目资助课题(1995BB1CJA6) 

主　　题：质粒 H-2K^d基因 小干扰RNA 

摘      要：目的构建针对BALB/C小鼠H-2Kd基因siRNA表达质粒,观察其在小鼠LAK细胞的表达,为进一步研究H-2Kd基因功能奠定基础。方法设计siRNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,通过与线性化的pSi-lencer 3.0-H1连接,转化大肠杆菌DH5a扩增纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列。采用siRNA表达质粒封闭小鼠LAK细胞MHC-I(H-2Kd)的表达,同时设空转染组和无关序列组,流式细胞术检测不同组别靶蛋白的表达。结果纯化的质粒分子量为2.8 Kb,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符,流式细胞术检测证实siRNA能够抑制靶蛋白的表达。结论成功构建了针对H-2Kd基因的siRNA表达质粒并抑制了其表达。