重组泡球蚴Em18蛋白不同纯化方法的比较

作     者：王慧 王红丽 王俊华 吕国栋 卢晓梅 王星 温浩 林仁勇 WANG Hui;WANG Hong-li;WANG Jun-hua;LU Guo-dong;LU Xiao-mei;WANG Xing;WEN Hao;LIN Ren-yong

作者机构：新疆医科大学第一附属医院医学研究中心新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2009年第19卷第6期

页      面：45-48页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)项目(No.2007AA02Z411)资助 

主　　题：泡球蚴 Em18重组蛋白 表达和纯化 鉴定 

摘      要：目的：比较不同方法纯化重组泡球蚴Em18的效果。方法：进一步对BL21-pET41a-Em18重组菌的诱导表达条件进行摸索优化,采用改良的超声程序破碎大肠杆菌细胞,分别经不同的纯化方法进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析,Western blot进行活性鉴定。结果：①在菌液OD600为0.8-1.0,加IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导3h,rEm18-GST重组蛋白得到成功高表达,在相对分子量为50kDa处有表达条带。②超声程序为：工作3 s,间歇4s,功率200~300W,超声体系中加入溶菌酶和蛋白酶抑制剂作用,可促进大肠杆菌细胞的破碎,降低目的蛋白的降解;加入终浓度为1%的Triton-X100作用可增加融合蛋白的可溶性。③通过比较不同方法纯化重组泡球蚴Em18的效果表明采用单纯His柱纯化可获得浓度高、纯度高的rEm18-GST重组蛋白。Western blot分析表明该蛋白能与泡型包虫病（AE）患者血清特异性反应。结论：建立了一种纯化原核表达Em18融合蛋白的较为经济和有效的方法,得到大量有生物学活性的Em18融合蛋白,为包虫病诊断试剂盒的研制奠定基础。