MCHR2在CHO细胞中的稳定表达及其信号通路分析

作     者：杨俊霞 袁成福 石华 魏丽丽 陈济 易发平 马永平 宋方洲 YANG Jun-xia;YUAN Cheng-fu;SHI Hua;WEI Li-li;CHEN Ji;YI Fa-ping;MA Yong-ping;SONG Fang-zhou

作者机构：重庆医科大学药理学教研室重庆市生物化学与分子药理学重点实验室重庆400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016 

出 版 物：《中国药理学通报》 (Chinese Pharmacological Bulletin)

年 卷 期：2008年第24卷第3期

页      面：294-299页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No30671008) 重庆市科委自然科学基金资助项目(NoCSTC,2007BA5012) 

主　　题：MCHR2 真核表达载体 稳定转染 基因表达 信号转导 

摘      要：目的构建人MCHR2基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并分析MCHR2介导的信号转导通路。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,定向插入到真核表达载体pcDNA3·1(+),经酶切和测序鉴定后,脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,经RT-PCR和Western blot鉴定后,通过测定细胞内cAMP、Ca2+浓度的改变分析MCHR2的信号转导通路。结果成功构建了pcDNA3·1-MCHR2真核表达载体并稳定转入CHO细胞,建立了稳定转染细胞系,成功地表达目的基因,MCH作用于MCHR2后不影响细胞内cAMP生成,可促使细胞内钙库释放Ca2+,进而使胞内Ca2+浓度出现明显而短暂的升高,提示MCHR2的信号转导通路主要是与Gq蛋白偶联。结论人MCHR2的稳定表达和信号转导通路分析为进一步体外研究MCHR2的功能提供了良好的实验基础。