抗李斯特菌溶血素单克隆抗体的制备及初步鉴定

作     者：董慧 焦新安 殷月兰 潘志明 黄金林 DONG Hui;JIAO Xin-an;YIN Yue-lan;PAN Zhi-ming;HUANG Jin-lin

作者机构：扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2008年第24卷第3期

页      面：240-242,246页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30425031) 教育部专项基金资助项目(200358) 

主　　题：李斯特菌溶血素 产单核细胞李斯特菌 单克隆抗体 

摘      要：目的:研制抗李斯特菌溶血素(LLO)的单克隆抗体(mAb)。方法:通过诱导重组大肠杆菌BL21(pGEX-6p-1-hly),以SDS-PAGE分离菌体蛋白,切割目的蛋白LLO-GST条带,研磨粉碎后免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合。利用亲和层析法纯化目的蛋白,作为检测抗原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA法测定腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb的特异性。结果:获得3株稳定分泌抗LLO mAb的杂交瘤细胞株3B6、4D1、5D10,其Ig亚类均为IgG1。3B6、4D1、5D10腹水的ELISA效价分别为1∶2×105、1∶2×105、1∶1×105。Western blot试验中,3株mAb均能与融合蛋白LLO-GST发生反应出现特异性条带,而与纯化蛋白GST不反应。在Dot-ELISA试验中,3株mAb均能与表达LLO的细菌发生特异性反应。结果表明,mAb 3B6、4D1、5D10是针对LLO的特异性mAb。结论:成功地制备了抗LLO的mAb,为进一步研究LLO的生物学特性、产单核细胞李斯特菌的致病机制,以及建立产单核细胞李斯特菌(LM)快速检测技术奠定了基础。