巨噬细胞炎性蛋白4的非融合表达载体的构建和表达

作     者：李树钧 钱桂生 戚好文 黄桂君 LI Shu-jun;QIAN Gui-sheng;QI Hao-wen;HUANG Gui-jun

作者机构：第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037 第四军医大学西京医院呼吸内科西安710032 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2005年第27卷第21期

页      面：2111-2114页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 100102[医学-免疫学] 071007[理学-遗传学] 10[医学] 

主　　题：趋化因子 基因克隆 基因表达 表达载体 

摘      要：目的探索如何抑制嗜酸性粒细胞的趋化作用,选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4(MIP4)的突变体(Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂,将Met-MIP4基因在原核细胞中进行非融合表达。方法设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变,将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸。以正常人肺cDNA文库为模板,PCR方法获取Met-MIP4基因。克隆入载体pUC19,测序验证序列已得到突变。将正确的基因插入到非融合表达载体pBV220中进行表达。结果PCR产物为220bp左右的片段,连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变。构建的pBV220非融合表达载体在大肠杆菌DH5-α中表达,经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约8×103的非融合蛋白表达。结论成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因。Tricine-SDS-PAGE表明,非融合的Met-MIP4突变体已得到表达,为进一步研究其对哮喘的生物治疗奠定了基础。