奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的克隆及原核表达

作     者：曹丽萍 丁炜东 CAO Li-ping;Ding Wei-dong

作者机构：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室江苏无锡214081 

出 版 物：《上海水产大学学报》 (Journal of Shanghai Fisheries University)

年 卷 期：2006年第15卷第3期

页      面：270-275页

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：国家"973"项目(2004CB117401) "863"项目(2004AA243060) 国家"十五"攻关(2004BA526B0110) 农业部海洋与河口重点开放实验室开放课题(开-2-04-01) 

主　　题：奥利亚罗非鱼 促性腺激素释放激素 相关肽 基因克隆 原核表达 

摘      要：促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。本研究通过RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约400 bp的目的序列GnRH,并将其克隆到T载体中,经酶切鉴定、序列测定分析后表明其与尼罗罗非鱼和乌颊海鲷具有较高的同源性,处于同一个进化分支上;而与日本青、金鱼、拟鲤、壁虎等的同源性较低。将此cDNA片段定向克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,转化到大肠杆菌TB1中,0.3M IPTG诱导4 h后成功表达出与预期大小相符的约56 kD的融合蛋白。表明大肠杆菌表达系统可以成功地体外表达奥利亚罗非鱼GnRH,为进一步制备抗体了解其免疫调节作用奠定基础。