分泌型PD-L1真核表达载体的构建、表达及其体外效应的初步研究

作     者：胡萍 季煜华 李君武 林绍强 韦静 李小兰 黄泽棋 HU Ping;JI Yu-hua;LI Jun-wu;LIN Shao-qiang;WEI jing;LI Xiao-lan;HUANG Ze-qi

作者机构：暨南大学医学院微生物和免疫学教研室广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2006年第26卷第11期

页      面：1009-1012页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：暨南大学引进人才启动基金(51205072) 广东省医学科研基金(A2006335) 

主　　题：PD-L1 混合淋巴细胞培养 细胞因子 1型糖尿病 

摘      要：目的构建分泌型PD-L1真核表达载体,并对其生物学活性进行初步研究。方法以RT-PCR方法从孕鼠胎盘中获得程序性死亡因子-1(programmed death-1,PD-1)配体PD-L1的胞外段基因片段,定向连接于pcDNA3．1上构建真核表达载体pcDNA-PDL1；用脂质体将重组子导入NIT细胞,转染后的NIT命名为NITp。以Western blot鉴定重组蛋白的表达。MTT比色法检测NITp细胞培养上清对同种混合淋巴细胞培养反应的影响；用ELISA试剂盒检测NITp细胞培养上清对反应性T细胞分泌的细胞因子的影响。结果RT-PCR得到约730bp目的基因片段,测序结果显示该目的基因与Gen- Bank上的序列相符；Western blot分析提示NITp分泌性表达目的蛋白；NITp培养上清可抑制混合淋巴细胞增殖,其效应呈剂量依赖性；反应性T细胞分泌的细胞因子检测结果显示,培养上清中IL-4、IFN-γ、IL-2水平降低,与正常对照组差异有统计学意义。结论成功构建PD-L1基因真核表达载体pcDNA-PDL1,PD-L1蛋白对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用,并可在一定程度上抑制特异性T细胞的活化。