人结核分枝杆菌特异性核酸探针制备及结核病PCR检测技术的初步临床应用

作     者：蔡宏 陈东 徐治新 李君莲 周文来 

作者机构：新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000 北京农业大学农业生物技术实验室北京100094 新疆结核病研究所乌鲁木齐830000 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：1996年第12卷第4期

页      面：466-470页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：新疆自治区科委自然科学基金 

主　　题：人结核分枝杆菌 特异性核酸探针 PCR 结核病 

摘      要：采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberulosis TB)染色体DNA为模板,选择位于插入片段IS6110中884～865和568～588碱基对处的两个片段为引物,扩增出317bp的特异性片段,将其克隆进pUC19载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段。该片段经DIG标记,分别与11种分枝杆菌DNA进行Southern杂交,结果证明只与人型复合分枝杆菌发生杂交反应。利用该对引物建立的PCR检测技术对74份结核病痰液标本进行检测,并与临床细菌快速培养结果相比较,发现48份临床阳性均为PCR阳性,在26份临床阴性标本中亦发现11份PCR检测阳性。将标本PCR产物与克隆探针进行杂交,显示两者结果完全一致。说明PCR检测体系结果可靠,其灵敏度明显高于目前临床所采用的方法,可作为一种常规技术用于结核病的临床检测。