抗汉坦病毒核衣壳蛋白单链抗体基因的克隆与鉴定

作     者：刘兵 史俊岩 王舰 王美莲 王斯 郑兰艳 牟玲 罗恩杰 

作者机构：中国医科大学基础医学院病原生物教研室辽宁沈阳110001 沈阳市传染病院肾综合征出血热研究所辽宁沈阳110003 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2009年第4卷第5期

页      面：325-328页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：辽宁省自然科学基金资助项目(No.20062101) 

主　　题：汉坦病毒 单链抗体 克隆 

摘      要：目的将已筛选出的抗汉坦病毒核衣壳蛋白(NP)抗原单链抗体基因克隆入原核表达载体pGEX-6p-1,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-scFv。方法提取含抗NP抗原单链抗体基因的T7噬菌体DNA,此为模板,PCR扩增单链抗体基因,BamHⅠ和SalⅠ双酶切,经连接酶与BamHⅠ和SalⅠ双酶切的表达载体pGEX-6p-1连接;重组DNA转化入宿主菌***-21(DE3),琼脂糖凝胶电泳初筛选阳性重组质粒,并用PCR法、双酶切法及DNA测序鉴定。结果重组质粒pGEX-6P-1-scFv经BamHⅠ和SalⅠ双酶切,片段大小分别为5 000 bp和750 bp,与预期值一致;重组质粒PCR产物大小为750 bp,与预期值一致;测定重组质粒序列,并与scFv序列比较,结果相一致。抗NP单链抗体基因序列克隆入表达载体pGEX-6p-1。结论成功构建了含抗汉坦病毒NP抗原单链抗体基因的重组原核表达质粒pGEX-6P-1-scFv。