HER2胞外段的克隆与原核表达

作     者：许银辉 郭晓芳 邬仙华 钱晨旭 罗磊 徐莲花 冯紫雅 张小影 Xu Yinhui;Guo Xiaofang;Wu Xianhua;Qian Chenxu;Luo Lei;Xu Lianhua;Feng Ziya;Zhang Xiaoying

作者机构：新乡医学院第二临床学院新乡453003 新乡医学院微生物教研室新乡453003 新乡医学院临床医学院新乡453003 新乡医学院医学检验系新乡453003 新乡医学院三全学院新乡453003 新乡医学院护理学院新乡453003 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2012年第28卷第8期

页      面：88-93页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：新乡医学院大学生科研创新重点支助项目(DXSKYKT2010-001) 

主　　题：人表皮生长因子受体2 胞外结构域 原核表达 pET-30a载体 

摘      要：应用RT-PCR技术从人乳腺癌细胞系SK-BR-3中克隆出人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factorreceptor 2,HER2)基因的胞外段,并插入到表达载体pET-30a中,得到重组表达载体pET30-HER2(Ex)。将该载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,加入IPTG进行诱导表达,成功获得HER2胞外段蛋白。分别提取培养液上清、大肠杆菌周质腔、细胞质可溶性及不可溶性组分蛋白进行SDS-PAGE电泳分析,确定目的蛋白定位于大肠杆菌细胞质包涵体中。通过改变诱导温度、诱导物浓度、诱导起始菌体密度和诱导时间,寻找最佳表达条件,使目的蛋白的表达量达到最高。结果表明,在37℃下,OD600达到1.0时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导4 h,目的蛋白的表达量最高。将重组表达菌进行超声破碎,分离出包涵体组分,经Ni2+亲和层析纯化后获得了纯度90%的HER2胞外段蛋白,从而为抗HER2抗体的制备及肿瘤疫苗的研究奠定了基础。