一种新型天蚕素杂合肽AD和aFGF突变体融合蛋白S的构建及表达

作     者：苏志坚 吴晓萍 郑青 黄亚东 庞实锋 冯雅 李校堃 

作者机构：暨南大学药学院生物制药教研室广东广州510632 暨南大学医药生物技术研究开发中心广东广州510632 

出 版 物：《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 (Journal of Jinan University(Natural Science & Medicine Edition))

年 卷 期：2004年第25卷第4期

页      面：420-425页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 08[工学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家十五"86 3"基金资助项目 (2002AA2Z3318 2 0 0 1AA2 15 131) 国家"973"基金资助项目 (G19990 5 4 2 0 4 ) 

主　　题：天蚕素杂合肽AD aFGF突变体 融合蛋白S 

摘      要：目的 :构建和表达一种带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD和人酸性成纤维细胞生长因子 (acidicfibroblastgrowthfactor ,aFGF)突变体的融合蛋白S ,在创伤皮肤表面应用时能自动裂解成有抗感染功能的天蚕素杂合肽AD和皮肤修复功能的aFGF突变体。方法 :利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD基因和aFGF突变体基因。再利用两者作为模板 ,用PCR方法扩增出编码融合蛋白S的DNA。将该DNA片段插入到载体pPICZαA中 ,并利用电转法将质粒转入毕赤酵母smd116 8中 ,Zeocin抗性筛选重组转化子。甲醇诱导 72h ,SDS -PAGE电泳检测融合蛋白S的表达 ,并用Western -blot杂交检测融合蛋白S的免疫原性。结果 :筛选出的重组转化株在甲醇诱导后能表达相对分子质量约为 190 0 0的融合蛋白S ,而该蛋白能与aFGF抗体产生免疫反应。结论 :用PCR方法获得编码含凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD和aFGF突变体的融合蛋白SDNA 。