胱天蛋白酶酶解BAG3蛋白的体外研究

作     者：张海燕 都镇先 孟欣 邓娓娓 王华芹 

作者机构：中国医科大学附属第一医院老年病科辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院内分泌科辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院生化与分子生物教研室辽宁沈阳110001 

出 版 物：《中华肿瘤防治杂志》 (Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment)

年 卷 期：2012年第19卷第24期

页      面：1863-1865页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：辽宁省教育厅资助(2009A765 L2010616) 

主　　题：胱天蛋白酶 BAG3 裂解 直接底物 

摘      要：目的:探讨BAG3是否为胱天蛋白酶的直接作用底物。方法:选取人胰腺癌细胞SW1990,分别设培养液处理空白对照组、蛋白酶体抑制剂MG132单独或与胱天蛋白酶抑制剂z-YVAD、z-DEVD、z-IETD或z-LEHD联合处理;利用重组胱天蛋白酶对重组BAG3蛋白进行体外酶解;蛋白质印迹法检测各组细胞中BAG3蛋白的裂解情况。结果:在体外,2mol/L胱天蛋白酶1抑制剂z-YVAD和2mol/L胱天蛋白酶8抑制剂z-IETD可以部分抑制,2mol/L胱天蛋白酶3抑制剂z-DEVD可以完全抑制,而胱天蛋白酶9抑制剂z-LEHD不能抑制MG132诱导的BAG3裂解;在胱天蛋白酶的体外酶切实验中,重组胱天蛋白酶1、3和8可以裂解BAG3,而胱天蛋白酶9不能剪切BAG3。另外,胱天蛋白酶3裂解BAG3的效率最高,0.1mol/L胱天蛋白酶3即可以对BAG3进行剪切,0.5mol/L胱天蛋白酶3可以完全酶切BAG3。结论:BAG3是胱天蛋白酶的直接作用底物,胱天蛋白酶3是执行BAG3裂解的主要胱天蛋白酶。