循环血小板活化与血小板-白细胞黏附的流式细胞分析法及其应用

作     者：崔巍 刘飒 董磊 袁慧 杨平 吴依娜 李玉琳 Cui Wei;Liu Sa;Dong Lei;Yuan Hui;Yang Ping;Wu Yina;Li Yulin

作者机构：首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心血管重塑相关疾病教育部重点实验室北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院检验科北京100029 

出 版 物：《首都医科大学学报》 (Journal of Capital Medical University)

年 卷 期：2015年第36卷第3期

页      面：414-419页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81230006 81000069) 

主　　题：循环血小板活化 血小板-白细胞黏附 流式细胞术 

摘      要：目的建立流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析循环血小板活化(circulating platelet activation,CPA)与血小板-白细胞黏附(platelet-leukocyte adhesion,PLA)方法,为临床开展血小板相关疾病研究奠定基础。方法选择50例健康志愿者,收集枸橼酸钠抗凝血,采用CD61/PAC-1/CD62P三色法检测CPA,分析血小板早期活化率(PAC-1^+CD62P^-)和晚期活化率(PAC-1^+CD62P^+);并设置0、5、10、15、20、30、60 min 7个时间点染色,分析样本放置时间对血小板活化的影响,建立参考值。采用CD61/CD3/CD19/CD11b/CD14/CD45六色法检测PLA,分析血小板一白细胞黏附CD45^+CD61^+(PLA)、血小板-T淋巴细胞黏附CD3^+CD61^+(PTLA)、血小板-B淋巴细胞黏附CD19^+CD61^+(PBLA)、血小板-单核细胞黏附CD14^+CD61^+(PMA)、血小板-中性粒细胞黏附CD45^(low+)CD11b^+CD61^+(PNA)表达率。结果宜选用15 min点建立健康人血小板活化参考范围,早期活化百分比为:3.75(1.00~9.80)%,晚期活化百分比为:0.10(0.00~0.10)%;FCM检测PIA、PTLA、PBLA、PMA、PNA表达率,其中PMA比例最高为:(10.75±3.23)%。结论 CPA检测血样放置时间不应超过15 min,PLA检测关键在于PMA分析。建立快速、稳定、准确的CPA和PLA检测方法是正确评价血小板功能的技术保障。