利用短短小芽孢杆菌启动子和信号肽编码序列构建穿梭分泌表达载体

作     者：张晓舟 闫新 崔中利 李顺鹏 ZHANG Xiao-zhou;YAN Xin;CUI Zhong-li;LI Shun-peng

作者机构：南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室南京210095 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2006年第46卷第4期

页      面：526-530页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(3030000540471073) 国家"863计划"(20042460702004214102) 国家科技攻关项目(2005BA516A02-012005BA516A02-02) 

主　　题：短短小芽孢杆菌 启动子 信号肽 分泌表达 枯草芽孢杆菌 

摘      要：以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点,将PCR产物双酶切后克隆至穿梭载体pP43NMK的相应位点构建分泌表达载体pP15MK,插入片段置于该载体中mpd基因的上游,并使信号肽编码序列与去除了自身信号肽编码序列的mpd基因阅读框恰好融合。将pP15MK导入枯草杆菌构建表达菌株1A751(pP15MK),在短短小芽孢杆菌启动子和信号肽元件的带动下,mpd基因能够在表达菌株的对数生长期和稳定期持续性高效分泌表达,表达产物结合在细胞膜上;发酵液在48h酶活达到最高值7.79U/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的8.1倍。