人肿瘤坏死因子相关凋亡配体克隆、表达及纯化

作     者：姚根宏 栾建凤 叶东 雷千红 朱培元 金洁 侯亚义 

作者机构：南京军区南京总医院输血科南京210002 

出 版 物：《卫生研究》 (Journal of Hygiene Research)

年 卷 期：2006年第35卷第6期

页      面：697-700页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 100214[医学-肿瘤学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：江苏省"六大人才高峰"项目资助(No.2005A3) 江苏省博士后基金资助(No.200601025B) 

主　　题：肿瘤坏死因子相关凋亡配体 基因克隆 融合蛋白 原核表达 

摘      要：目的应用基因工程技术克隆人肿瘤坏死因子相关凋亡配体分子胞外区（TRAIL）114～281片段的cDNA，构建其原核表达载体，建立原核表达体系。方法采用RT-PCR方法从外周血单个核细胞的总RNA中扩增TRAIL分子的cDNA，克隆入T载体，阳性克隆经过RT-PCR、酶切和测序鉴定。将阳性克隆中TRAIL再亚克隆至原核表达载体pET28a，构建的表达载体用RT-PCR和酶切来验证，IPTG诱导表达。融合表达蛋白复性后，再用层析纯化表达产物。结果电泳显示RT-PCR产物约500bp，与预期值一致。TA克隆RT-PCR和酶切鉴定时的片段大小也为500bp。阳性克隆测序结果与GeneBank报道一致。构建的原核表达载体经RT-PCR和酶切鉴定后用IPTG诱导后，得到大量的融合表达蛋白，此蛋白是以包涵体形式存在的，对表达的蛋白复性和纯化后，电泳显示得到一条约20kD的蛋白条带。结论成功地构建了人肿瘤坏死因子相关凋亡配体分子原核表达载体。