结核分枝杆菌抗毒素higA的原核表达及多克隆抗体制备

作     者：刘丹 伊正君 付玉荣 李书轻 杨珊珊 LIU Dan;YI Zhengjun;FU Yurong;LI Shuqing;YANG Shanshan

作者机构：潍坊医学院临床检验诊断学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院附属医院检验科山东省临床检验诊断学高校重点实验室山东潍坊261031 潍坊医学院基础医学院病原生物学教研室山东潍坊261053 菏泽市第三人民医院检验科山东菏泽274031 中国人民解放军第401医院检验科山东青岛266000 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2015年第31卷第7期

页      面：972-976,981页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30972639 81170080) 

主　　题：结核分枝杆菌 毒素抗毒素系统 higA 多克隆抗体 

摘      要：目的克隆编码结核分枝杆菌抗毒素基因hig A并在大肠杆菌中表达,纯化hig A蛋白后,制备兔抗hig A的多克隆抗体。方法利用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增hig A基因;构建重组表达质粒p ET-32a(+)-hig A;筛选出阳性重组质粒后,转化大肠杆菌BL21,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达;利用SDS-PAGE与Western blot法鉴定目的蛋白的表达;以纯化的hig A蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗hig A的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定。结果成功扩增出了hig A基因,克隆于载体p ET-32a(+)质粒中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确;转化大肠杆菌BL21后能成功诱导hig A蛋白[相对分子质量(Mr)36 630]的表达;利用纯化的hig A蛋白免疫新西兰大白兔后,能有效地刺激特异性hig A抗体的产生,抗体的效价达到1∶3200以上。结论成功在大肠杆菌中表达出hig A蛋白,并制备出效价及特异性良好的兔抗hig A多克隆抗体。