葡萄糖神经酰胺合成酶siRNA表达载体的构建

作     者：张艳 周慧聪 陈辉 乐晓萍 夏彬 陈香红 张钦宪 ZHANG Yan;ZHOU Huicong;CHEN Hui;LE Xiaoping;XIA Bin;CHEN Xianghong;ZHANG Qinxian

作者机构：郑州大学基础医学院药理学教研室 郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450001 郑州大学第一附属医院消化内科 郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室 郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室郑州450001 

出 版 物：《郑州大学学报（医学版）》 (Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences))

年 卷 期：2007年第42卷第3期

页      面：467-470页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：河南省重大科技攻关基金资助项目0222031300 

主　　题：葡萄糖神经酰胺合成酶 siRNA 表达载体 胃肿瘤 

摘      要：目的构建针对葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)mRNA的siRNA表达载体,并观察其对转染细胞中GCS表达的影响。方法根据人GCSmRNA编码序列,设计并合成3对针对GCS的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入pSUPEREGFP载体重组构建RNAi质粒,进行双酶切及测序鉴定。重组质粒用脂质体包裹转染入SGC7901/VCR细胞,采用RT-PCR检测GCSmRNA表达水平的变化。结果重组构建的载体经酶切鉴定与测序分析,显示特定位点靶序列与设计序列完全一致。转染SGC7901/VCR细胞后,GCSmRNA表达明显降低。结论GCSsiRNA表达载体构建成功,并可有效抑制人胃癌耐药SGC7901/VCR细胞中GCS的表达,为后续研究及肿瘤的基因治疗奠定了基础。