不同RT-PCR方法学的探讨

作     者：李铁臣 曹宏伟 张艳 江潇 汪萌芽 LI Tie-chen;CAO Hong-wei;ZHANG Yan;JIANG Xiao;WANG Meng-ya

作者机构：皖南医学院分子生物学研究室安徽芜湖241002 皖南医学院 细胞电生理研究室安徽芜湖241002 

出 版 物：《皖南医学院学报》 (Journal of Wannan Medical College)

年 卷 期：2008年第27卷第2期

页      面：94-97页

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(30270366) 

主　　题：微量RNA 两步法RT-PCR 一步法RT-PCR 

摘      要：目的:探讨微量RNA标本的RT-PCR方法。方法:采集13例新生大鼠脊髓标本,提取RNA,分别稀释至1μg/μl、1ng/μl和1 pg/μl,分别以两步法RT-PCR、Promega公司和Qiagen公司一步法RT-PCR试剂盒,扩增β-actin基因,经1.5%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,紫外透射仪下观察分析。结果:浓度为1μg/μl和1ng/μl的标本,三种方法均出现了目标带,而浓度为1 pg/μl的标本,两步法RT- PCR、Promega公司和Qiagen公司一步法RT-PCR试剂盒的阳性率分别为85%、77%和100%。结论:一步法敏感性高于两步法,微量RNA标本以采用Qiagen公司的一步法试剂盒进行RT-PCR实验为好。