革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用

作     者：王景 穆媛嫒 黎庶 陈志瑾 熊坤 丛延广 WANG Jing;MU Yuan-yuan;LI Shu;CHEN Zhi-jin;XIONG Kun;CONG Yan-guang

作者机构：第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 遵义医学院研究生院贵州遵义563003 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2009年第31卷第23期

页      面：2299-2301页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 100103[医学-病原生物学] 071007[理学-遗传学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(30500435) 

主　　题：敲除 载体构建 突变株 基因功能 

摘      要：目的构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性。方法构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点oriR6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ-ApaⅠ-SfiⅠ-SacⅠ-NotⅠ-SpeⅠ-NdeⅠ-SacⅡ-BglⅡ;反向选择标志SacB;正向选择标志卡那霉素抗性片段。载体构建完成后,采用该载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行框架内敲除,以验证其有效性。结果成功构建了敲除载体,命名为pYG4,并对yeeZ基因进行了框架内精确敲除获得突变株。结论本研究构建的载体适用于对革兰阴性菌进行目的基因的精确敲除,将在细菌基因功能研究中得到广泛的应用。