鸡源细胞基因沉默及快速筛选的实用型双标记RNAi载体

作     者：李培培 游雷鸣 罗俊 鄂魏 蒋志政 郅玉宝 张改平 王爱萍 LI Pei-pei;YOU Lei-ming;LOU Jun;E Wei;JIANG Zhi-zheng;ZHI Yu-bao;ZHANG Gai-ping;WANG Ai-ping

作者机构：农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南省农业科学院郑州450002 郑州大学生物工程系郑州450001 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2011年第31卷第11期

页      面：81-89页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金："十一五"国家科技支撑计划(2006BAD06A04-6) 河南省基础与前沿技术研究计划(082300433201)资助项目 

主　　题：EGFP H1启动子 RNAi载体 双标记筛选 

摘      要：利用人H1 RNA启动子、EGFP基因及Neomycin抗性基因,构建用于禽类细胞基因持续沉默和快速筛选的实用型RNAi载体。在将pCDNA3.1(+)载体上的SV40启动子替换为鸡源的β-actin启动子后,装入EGFP基因表达框以及用于驱动外源shRNA转录的人H1 RNA启动子,构建成同时具有EGFP和Neomycin抗性双标记的RNAi载体,并为载体引入独特设计的含媒介序列的多克隆位点以方便外源shRNA编码小片断插入后的快速筛选,载体设计非常实用。插入靶向EGFP和sIgMλ基因的shRNA编码序列后分别瞬时转染DF-1和DT40细胞,结果显示靶基因表达得到了明显抑制。联用EGFP和Neomycin双标记快速筛选sIgMλ轻链基因稳定沉默的DT40细胞克隆的结果也证实,H1启动子转录shRNA的干扰效果是高效的,双标记筛选策略不仅有效而且方便、快捷。