生殖支原体环介导等温扩增检测方法的建立

作     者：杨天 陈璐斯 胡一珉 周瑾 吴建茹 周良佳 谢彦昕 王蓓 

作者机构：东南大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室南京210009 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2014年第32卷第11期

页      面：860-862页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

基　　金：国家大学生创新训练计划项目(1210286101) 

主　　题：生殖支原体 环介导等温扩增 

摘      要：目的建立检测生殖支原体(***,Mg)的环介导等温扩增方法。方法根据Gen Bank公布的Mg核苷酸序列,设计4条特异性引物,进行PCR反应,对内、外引物浓度,d NTPs和Mg SO4浓度及Bst DNA聚合酶用量等进行优化,建立Mg LAMP的检测方法并进行特异性和敏感性评价;对20份HIV感染者的DNA样本分别进行LAMP和常规PCR检测。结果内、外引物浓度分别为1.6和0.2μmol/L,d NTPs浓度为1.6 mmol/L,Mg SO4浓度为12 mmol/L,Bst DNA聚合酶用量为8 U时,LAMP反应效果较好;用该体系检测同源关系较近的穿通支原体(***,Mpe)、梨支原体(***,Mpi)均呈阴性;对Mg的检测灵敏度可达10-7;20份HIV感染者用LAMP法及常规PCR法各检出Mg阳性标本5份,两法的检测结果一致。结论建立的Mg LAMP检测方法的特异性、灵敏度较好,成本低廉,适合临床应用。