不同分离缓冲液对杉木根尖细胞核悬液DNA分辨率的影响

作     者：沈捷 徐进 刘光欣 施季森 Shen Jie;Xu Jin;Liu Guangxin;Shi Jisen

作者机构：林木遗传和生物技术省部共建教育部重点实验室、南京林业大学南京210037 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2015年第13卷第1期

页      面：190-196页

核心收录：

学科分类：0907[农学-林学] 08[工学] 0829[工学-林业工程] 09[农学] 

基　　金：国家自然基金重点项目(30930077)资助 

主　　题：杉木 流式细胞术 细胞核悬液 细胞核分离缓冲液 

摘      要：为制备高纯度的杉木细胞核悬液供BD Influx TM流式细胞分选仪使用,本研究配制了6种细胞核分离缓冲液制备样品,就不同分离缓冲液对DNA分辨效果进行比较。研究结果显示,WPB buffer不能获得有效分辨的峰形,而OTTO＇s buffer表现为最高的分辨率,G0/G1峰的变异系数为4.61%。其余4种细胞核分离缓冲液（Arumuganathan＇s buffer,Galbraith＇s buffer,Lysis buffer LB01和Marie＇s nuclear isolation buffer）的变异系数在5%~8%之间（分别为5.49%,7.30%,5.12%和6.89%）。本研究分别选用了DAPI和PI对细胞核悬液进行染色发现,利用DAPI染料获得的柱状图CV值更小、分辨率更高。研究结果表明,利用Lysis buffer LB01分离缓冲液,结合DAPI染色,可以制备得高纯度的杉木根尖细胞核悬液。这一结果为杉木根尖细胞有丝分裂中期同步化和染色体分选提供实验依据。