氟砷联合暴露对大鼠成骨细胞增殖分化及β-连环蛋白表达的影响

作     者：宋晓甜 洪峰 Song Xiaotian;Hong Feng

作者机构：贵州医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室贵阳550025 

出 版 物：《中华地方病学杂志》 (Chinese Journal of Endemiology)

年 卷 期：2016年第35卷第5期

页      面：344-349页

核心收录：

学科分类：100405[医学-卫生毒理学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81472927) 

主　　题：氟 砷 联合作用 成骨细胞 β-连环蛋白 

摘      要：目的探讨氟砷联合暴露对大鼠成骨细胞（OB）增殖、分化及β-连环蛋白（β-eatenin）表达的影响。方法取12只出生1—3d spraguedawley（SD）大鼠乳鼠颅盖骨，采用胰蛋白酶和胶原酶消化法分离OB后进行传代培养。取第三代OB，采用析因实验设计（2因素3水平）方法分成9组[***0（对照组）、F0．5As0.0、F40AS0、FAsnl、F00As＆***、F05As100、F4．0Asnl、F4．0As10.0]，其中氟化钠（F-）分别为O．0、0．5、4．0mmol／L，F0．0、Fk、F40，亚砷酸钠（As3＋）分别为O．O、0．1、10．0μmol／L，As0.0、As0.1，染毒干预72h。染毒结束后采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应（MTr）比色法检测各染毒组OB增殖率：采用酶联免疫吸附实验（V,L[SA）检测细胞培养液中碱性磷酸酶（ALP）活性，用以分析对OB分化的影响；采用SYBRGreen荧光定量PCR法检测细胞中B—cateninmRNA表达；采用免疫蛋白印迹（Westernblot）法检测***蛋白表达。结果①大鼠OB在处理72h后，OB增殖率[吸光度（A）]、ALP活性（U／L）组间差异有统计学意义（F=14．022、14．425，P均〈0．05），与对照组比较，F0.5As0.0组表现为促进增殖，提高AIJP活性（0.313±0.023VS0.455±0.152,4.46±0.72VS6.09±0.68,P均〈0．05），而F4.0As0.0组为抑制OB增殖（0．029±0．014，P〈0．05）；与对照组比较，F0．0As0.1组表现为促进OB增殖、降低ALP活性（0．370±0．029，3．68±0．45，P均〈0．05），而F0.0As10.0组表现为抑制OB增殖、提高ALP活性（0．156±0．010，6．29±0．67，P均〈0．05）。②Asn0时，各染氟组β-eateninmRNA表达及其蛋白表达比较差异有统计学意义（F=7．782、559．455，P均〈0．05），与对照组比较，F05Asn0组***及蛋白的表达显著升高（1．00±0．32VS1．99±0．14，3．56±0．15vs5．11±0．26，P均〈0．05），而F44S00组β-eatenin蛋白降低明显（1．10±0．02，P〈0．05）；F0.0时，各染砷组β-eatenin蛋白表达比较差异有统计学意义（F=154．736，P〈0．05）。③氟、砷对OB的增殖率、β-eateninmRNA及其蛋白表达均有主效应（F=82．081、11．991、514．741；19．302、8．753、523．698，P均〈0．05），砷对ALP活性影响也表现为主效应（F=17．444，P〈0．05）；氟砷联合对OB增殖、分化、β-eateninmRNA及其蛋白均具有交互作用（F=13．085、18．157、4．936、426．036，P均〈0．05）。结论氟、砷均可以通过影响大鼠OB增殖、分化及β-cateninmRNA及蛋白表达，影响骨的重建过程。