人干燥综合征B抗原在巴斯德毕赤酵母菌中的高效分泌表达研究

作     者：杨湘越 兰小鹏 吴文冰 冯福英 廖剑 朱忠勇 YANG Xiang-yue;LAN Xiao-peng;WU Wen-bing;FENG Fu-ying;LIAO Jian;ZHU Zhong-yong

作者机构：南京军区福州总医院解放军医学检验中心福建福州350025 

出 版 物：《医学研究生学报》 (Journal of Medical Postgraduates)

年 卷 期：2006年第19卷第11期

页      面：976-979页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：福建省青年人才科技创新基金资助项目(批准号:2002J060) 

主　　题：人干燥综合征B抗原 克隆表达 巴斯德毕赤酵母菌 

摘      要：目的：通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B（SS—B）抗原。方法：PCR扩增SS—B基因，与酵母菌表达载体pPIC9k重组，构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168，在MD平板上筛选重组克隆，用G418快速筛选高拷贝转化子，阳性克隆经甲醇诱导表达后，培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和免疫酶斑点法鉴定。结果：PCR产物约为1200bp，与预期1224bp接近；pPIC9k—SS-B重组阳性克隆测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致，双酶切鉴定正确。表达产物SS-B的相对分子质量约48000，高拷贝毕赤酵母菌转化菌显著高于低拷贝的表达水平，表达量占分泌总蛋白的60％以上，产物浓度为800～900mg／L。免疫酶斑点法证实表达产物具有天然SS—B分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。结论：SS—B存巴斯德毕赤酵母菌中获得高效分泌表达，为下一步研究打下了基础。