人溶菌酶N端与Exendin-4嵌合蛋白的基因克隆及原核表达

作     者：王明 刘宇婷 潘霞明 曾可静 朱元昌 周羽竝 刘誉 WANG Ming;LIU Yu-ting;PAN Xia-ming;ZENG Ke-jing;ZHU Yuan-chang;ZHOU Yu-bin;LIU Yu

作者机构：暨南大学医学院生物化学教研室广东广州510632 暨南大学医学院临床医学系广东广州510632 

出 版 物：《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 (Journal of Jinan University(Natural Science & Medicine Edition))

年 卷 期：2009年第30卷第6期

页      面：595-600页

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：广东省科技计划项目(2006B35502010) 暨南大学引进人才启动基金项目(51204004) 

主　　题：Exendin 4 人溶菌酶 嵌合多肽 原核表达 糖尿病 

摘      要：目的:克隆嵌合多肽人溶菌酶N端-Exendin-4基因并进行原核表达和纯化。方法:通过重组PCR技术将人溶菌酶N端74个氨基酸的基因序列与Exendin-4多肽基因序列相连接,其间引入一段由凝血酶和二肽基肽酶识别位点组成的连接序列。以嵌合基因hLYZ(N74)-Ex4与质粒pET-32a(+)构建原核表达体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。表达蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化、Western blotting鉴定;透析复性后,以肠激酶切割并回收目的多肽。结果:重组质粒pET-32a/hLYZ(N74)-Ex4构建正确,目的蛋白主要以包涵体形式存在,37℃诱导4h、IPTG浓度为0.6 mmol/L时表达量最高,约占菌体蛋白总量的30%。Western blotting检测显示重组蛋白为单一清晰条带。重组蛋白经肠激酶切割后,回收得到高纯度的嵌合多肽。结论:成功构建hLYZ(N74)-Ex4嵌合基因的原核表达质粒,高效原核表达并获得高纯度目的蛋白。