深海沉积物微生物元基因组文库来源的新的酯酶基因的克隆、表达及酶学性质

作     者：徐士庆 胡永飞 袁爱花 朱宝利 Shiqing Xu;Yongfei Hu;Aihua Yuan;Baoli Zhu

作者机构：中国科学院微生物研究所中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2010年第50卷第7期

页      面：891-896页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 071005[理学-微生物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

基　　金：国家"863计划"(2007AA09Z443 2007AA021301) 中国科学院知识创新工程项目(KSCX2-YW-G-022) 国家自然科学基金(30770060) 

主　　题：深海沉积物 元基因组文库 低温酯酶 酶学特征 

摘      要：【目的】从深海沉积物微生物元基因组文库中克隆新的酯酶基因,并进行酶学性质研究。【方法】利用含有三丁酸甘油酯的酯酶选择性筛选培养基,从深海沉积物微生物元基因组文库中筛选得到酯酶阳性Fosmid克隆。对筛选得到的fosmid FL10进行部分酶切构建亚克隆文库,筛选得到酯酶阳性亚克隆pFLS10。PCR扩增目的片段后与pET28a连接构建酯酶基因原核表达质粒,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21。纯化表达产物并对其进行活性测定及酶学性质研究。【结果】序列分析显示该pFLS10亚克隆质粒含有一段924bp的ORF(Open Reading Frame),与一海洋元基因组文库中筛选出的酯酶ADA70030序列一致性为71%。该酶为一新的低温酯酶,对C4底物(对硝基苯丁酸酯)水解能力最强。该酶最适作用温度为20℃,最适作用pH为7.5,20℃时较为稳定,pH8-10的范围内有良好的pH稳定性,K+、Mg2+对该酶具有一定的激活作用,Mn2+等对其具有不同程度的抑制作用。【结论】应用元基因组技术筛选到了新的酯酶基因fls10并进行了克隆表达,该酶在低温及碱性条件下较为稳定且活力较高,对于工业化生产具有一定的应用潜力。关键词:深海沉积物;元基因组文库;低温酯酶;