腺病毒细菌重组系统表达Crg-2蛋白的实验研究

作     者：宁寒冰 赵丽娜 李婷婷 王晓霞 李继昌 刘志国 樊代明 NING Han-bing;ZHAO Li-na;LI Ting-ting;WANG Xiao-xia;LI Ji-chang;LIU Zhi-guo;FAN Dai-ming

作者机构：第四军医大学西京医院全军消化病研究所国家肿瘤生物学重点实验室 郑州大学第一附属医院消化内科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院消化内科 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2006年第22卷第3期

页      面：283-285页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30400016) 第四军医大学后备人才基金资助(No.4138A4324) 

主　　题：腺病毒 同源重组 趋化因子 crg-2 

摘      要：目的利用腺病毒的细菌重组系统表达同时具有免疫趋化及血管抑制活性的趋化性细胞因子Crg-2重组蛋白。方法首先在大肠杆菌BJ5183中将穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与AdE1区基因缺失的骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,筛选后脂质体法转染入具有AdE1区组成性表达的293包装细胞中进行病毒包装、扩增;Westernblot检测病毒感染293细胞的蛋白表达;趋化实验检测感染细胞上清对激活T淋巴细胞的趋化活性。结果穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与骨架质粒pAdEasy-1重组后,经酶切及PCR鉴定获得重组腺病毒基因组质粒pAd/crg-2;病毒Ad/crg-2经包装并扩增后,用组织培养感染半数剂量法(TCID50)法测定病毒滴度达4×109TCID50/L,感染细胞经Westernblot检测有一接近Mr10000蛋白条带,分泌上清对激活的脾淋巴细胞有明显的趋化作用。结论采用细菌重组法成功获得重组腺病毒Ad/crg-2,可高效表达趋化性细胞因子Crg-2。