大豆花叶病毒CP基因RNAi载体的构建及大豆遗传转化

作     者：高乐 翟锐 丁雪妮 李凯 廖文林 智海剑 Gao Le;Zhai Rui;Ding Xueni;Li Kai;Liao Wenlin;Zhi Haijian

作者机构：南京农业大学国家大豆改良中心作物遗传与种质创新国家重点实验室农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室南京210095 

出 版 物：《植物保护学报》 (Journal of Plant Protection)

年 卷 期：2014年第41卷第4期

页      面：453-460页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：转基因生物新品种培育科技重大专项(2008ZX08004-004) 国家自然科学基金(31171574 31371646 31101164) 农业部大豆产业技术体系(CARS-004) 

主　　题：大豆花叶病毒 CP基因 RNAi GATEWAY技术 农杆菌介导大豆转基因 

摘      要：为获得含有大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)CP基因干扰片段的转基因大豆新材料,对11个SMV流行株系的CP基因进行了核苷酸序列比对,采用GATEWAY技术构建了RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体pB7GWIWG2(Ⅱ)-CPi,对重组载体测序比对,通过酶切以及PCR方法鉴定载体,并利用农杆菌介导的转基因体系进行大豆遗传转化。克隆出264 bp高度保守的CPi干扰片段,通过测序证实其与目标序列的匹配度达到100%;重组质粒经过XbaⅠ单酶切后出现783 bp和10818bp两条带,经过EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后出现2256bp和9346bp两条带,说明2个ccdB结合位点均被CPi取代;PCR反应得到474 bp和460 bp两条带,说明CPi以反向重复形式与pB7GWIWG2(Ⅱ)组合。共获得10棵T0代转基因幼苗,经除草剂涂抹、PCR、PAT/bar转基因检测试纸检测后,6株为阳性,表明该方法可筛选出对大豆花叶病毒具有抗性的转基因大豆新种质,为SMV抗病育种工程提供良好的亲本材料。