猴副流感病毒SV5 PCR检测方法的建立与初步应用

作     者：于浩 蒋虹 佟巍 丛喆 孙敏 冯育芳 王卫 涂新明 魏强 YU Hao;JIANG Hong;TONG Wei;CONG Zhe;SUN Min;FENG Yu-fang;WANG Wei;TU Xin-min;WEI Qiang

作者机构：中国医学科学院实验动物研究所中国协和医科大学实验动物学部北京100021 

出 版 物：《中国实验动物学报》 (Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica)

年 卷 期：2006年第14卷第1期

页      面：32-35页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 07[理学] 071005[理学-微生物学] 10[医学] 

基　　金：科技部科技基础性工作专项(编号:2002DEA20023) 

主　　题：猴副流感病毒SV5 聚合酶链反应 巢式PCR 检测 

摘      要：目的建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。方法根据GenBank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。结果利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccⅢ限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。结论初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。