新型隐球菌Cap10蛋白的重组表达及多克隆抗体制备

作     者：王欣 于虹 佟双 杨裔 高基民 寇志华 周育森 

作者机构：温州医学院检验与生命科学院浙江温州325035 北京微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 

出 版 物：《中国卫生检验杂志》 (Chinese Journal of Health Laboratory Technology)

年 卷 期：2012年第22卷第6期

页      面：1229-1231,1236页

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：传染病重大专项(2008ZX10001-007) 

主　　题：新型隐球菌 荚膜相关蛋白10(Cap10) B细胞表位 多克隆抗体 

摘      要：目的:重组表达新型隐球菌Cap10蛋白并制备特异抗体,为新型隐球菌的检测和诊断提供特异抗原和抗体。方法:选择CAP10基因开放阅读框架(ORF)抗原表位集中、保守性高的片段,经过大肠杆菌偏嗜的密码子优化后进行基因合成,将目的片段克隆至原核表达载体pQE30中构建重组蛋白表达载体pQE30-CAP10并鉴定,IPTG诱导重组蛋白在M15中表达,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定;镍柱纯化后,免疫家兔制备抗血清。结果:在大肠杆菌中成功表达Cap10,其纯度大于95%;二免后家兔血清抗体效价达到200万以上。结论:获得了高纯度的Cap10蛋白及高效价的多克隆抗体,为新型隐球菌的检测和致病机制研究奠定了基础。