Smad6和Smad7基因腺相关病毒载体的构建及其表达

作     者：黄云剑 赵景宏 杨唐俊 张金海 蔡文琴 

作者机构：第三军医大学新桥医院肾内科重庆400037 第三军医大学基础部神经生物学教研室重庆400038 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2004年第20卷第3期

页      面：274-277页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目 (No.30 1 0 0 0 83) 全军"十五"医药卫生青年科研课题基金资助项目 (No.0 1Q1 0 3) 中国博士后基金资助项目(No .2 0 0 30 33364) 

主　　题：Smad 6 Smad 7 腺相关病毒载体 TGF-β 基因转染 肾小管上皮细胞 

摘      要：目的 :构建Smad 6和Smad 7基因腺相关病毒 (AAV)载体 ,并转染到人肾小管上皮细胞中表达。方法 :利用基因重组技术 ,采用BamHI和XhoI双酶分别将pcDNA3中的目的基因Smad6 /flag和Smad 7/flag融合基因片断切出 ,再克隆到质粒pAAV MCS中 ,构建重组质粒pAA Smad 6 /flag和pAA Smad 7/flag。采用磷酸钙沉淀法 ,以重组质粒或pAAV LacZ以及pAAV RC、pHelper共转染HEK2 93细胞 ,产生均有传染性的病毒颗粒。再将此病毒颗粒转染到培养的人肾小管细胞中 ,用免疫组化法检测其Smad 6和Smad 7转移基因的表达。结果 :成功地构建Smad 6和Smad 7基因的腺相关病毒载体 ,并可在肾小管上皮细胞中表达Smad 6和Smad 7。结论 :肾小管细胞能稳定、高效表达外源Smad 6和Smad 7,为今后建立Smad 6和Smad