靶向IRE1a干扰质粒构建及对ERS时细胞增殖及凋亡的影响

作     者：姜蓉 刘艳娜 周菁华 刘平 郭风劲 JIANG Rong;LIU Yanna;ZHOU Jinghua;LIU Ping;GUO Fengjin

作者机构：重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆市400016 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆市400016 重庆医科大学发育生物学与模式动物平台重庆市400016 

出 版 物：《医学分子生物学杂志》 (Journal of Medical Molecular Biology)

年 卷 期：2012年第9卷第2期

页      面：103-109页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 071009[理学-细胞生物学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(No.81171697) 重庆市自然科学基金(No.2011jjA10047) 

主　　题：IRE1a shRNA 细胞增殖 细胞凋亡 

摘      要：目的构建靶向人IRE1a的shRNA干扰质粒（pSUPER-IRE1a）并观察其对人HeLa细胞和HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法设计并合成靶向IRE1a基因的两条shRNA，分别克隆至真核表达载体pSUPER构建重组质粒pS1、pS2，依次转染入HeLa细胞和HepG2细胞中。采用RT—PCR检测pS1、pS2转染前后IRE1a在HeLa细胞和HepG2细胞中的mRNA水平，免疫印迹检测pS1、pS2转染前后IRE1a蛋白的表达；MTT比色法、BrdU／DAPI双免疫荧光法及流式细胞仪分别检测各重组质粒对HeLa细胞和HepG2细胞增殖及凋亡的影响。结果干扰质粒（pSUPER-IRE1a）能有效抑制HeLa细胞和HepG2细胞中IRE1a基因的表达；成功转染后，细胞处于内质网应激（ER stress）状态时，各实验组细胞增殖率及凋亡率与对照组比较，差异均具有统计学意义P〈0．05）。结论成功构建靶向人IRE1a的shRNA真核表达载体pS1、pS2，有效抑制了HeLa细胞和HepG2细胞中IRE1a的表达；细胞处于ERS状态时，IRE1a-shRNA有效促进HeLa、HepG2两种肿瘤细胞的增殖；抑制HeLa和HepG2细胞的凋亡。