南药益智AFLP-PCR体系的建立与优化

作     者：高炳淼 潘坤 田建平 唐天乐 魏娜 张俊清 Bingmiao Gao;Kun Pan;Jianping Tian;Tianle Tang;Na Wei;Junqing Zhang

作者机构：海南医学院药学院海南海口571199 海南省热带药用植物研究开发重点实验室海南海口571199 海南医学院热带医学与检验医学院海南海口571199 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2015年第25卷第3期

页      面：251-255页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：海南省自然科学基金项目("益智遗传多样性的AFLP分析" No.814291) 海南医学院药学院大学生创新课题("益智AFLP-PCR体系的建立与优化" No.Hyydc2013004) 海南医学院引进人才科研启动经费资助 

主　　题：益智 AFLP-PCR 体系优化 引物筛选 

摘      要：[目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。[方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合益智AFLP分析的引物组合进行筛选。[结果]实验结果表明最佳酶切反应体系:模板DNA 0.6μg,酶量20 U,酶切时间2 h;最佳AFLP-PCR选择性扩增反应体系(总体积为25μL):10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5μL,d NTPs 2μL,Mg2+(25mmol/L)1.5μL,引物(10 pmol/μL)各2.0μL,Taq酶(5 U/ml)0.5μL,模板稀释25倍2μL。利用建立的最佳扩增体系从64对引物中筛选获得8对选择性引物适合益智AFLP分析。[结论]建立了稳定的AFLP-PCR体系,为研究益智遗传多样性的AFLP分析奠定了基础。