大片吸虫钙结合蛋白2基因的克隆表达及其表达产物的免疫活性研究

作     者：袁晓丹 张念章 黄思扬 马元元 王春仁 朱兴全 YUAN Xiao-dan;ZHANG Nian-zhang;HUANG Si-yang;MA Yuan-yuan;WANG Chun-ren;ZHU Xing-quan

作者机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2019年第49卷第3期

页      面：294-300页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973)项目(2015CB150300) 国家重点研发计划项目(2017YFD0501200) 

主　　题：大片吸虫 钙结合蛋白2(CaBP2) 克隆 表达 诊断候选抗原 

摘      要：通过克隆、表达大片吸虫钙结合蛋白2(FgCaBP2)基因,旨在探索其作为诊断抗原的可行性。在分析大片吸虫蛋白组数据的基础上,根据肝片吸虫CaBP2基因组序列和转录组数据,设计以NdeⅠ和XhoⅠ作为酶切位点的引物。以大片吸虫总RNA为模板,通过RT-PCR获得FgCaBP2基因,对其进行测序、生物信息学分析。构建pET-30a-FgCaBP2重组表达载体,在大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中完成诱导、表达;对纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析,并用目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果表明,FgCaBP2基因的开放阅读框长570 bp,编码189个氨基酸残基。生物信息学预测显示,FgCaBP2主要以α螺旋为主,β折叠较少,有7个β转角、4个较长的无规则卷曲、含有4个亲水区、具有较多的B细胞抗原表位。SDS-PAGE分析表明,FgCaBP2呈现出可溶性表达。Western-blot分析表明,25 ku大小的特异性目的蛋白条带能够很好地被大片吸虫感染的阳性水牛血清识别,具有良好的免疫反应性。本研究成功克隆了FgCaBP2基因,并获得了可溶性重组蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,是潜在的大片吸虫病诊断抗原。