多重RT-PCR检测猪流感病毒及血清亚型

作     者：刘惠莉 周宗清 邢继兰 潘洁 杨秋峰 饶柏忠 LIU Hui-li;ZHOU Zong-qing;XING Ji-lan;PAN Jie;YANG Qiu-feng;RAO Bai-zhong

作者机构：上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2008年第28卷第11期

页      面：1262-1265页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：上海市农委重点攻关资助项目(沪农科2004第12-2号) 

主　　题：猪流感病毒 血凝素亚型 神经氨酸酶亚型 多重RT—PCR 

摘      要：根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%。