表达载脂蛋白L1稳定细胞系的构建

作     者：曹观华 曹广进 刘舒宁 程晓敏 仇艺娴 李凌 朱利 CAO Guan hua;CAO Guang-jin;LIU Shu ning;CHENG Xiao-min;CHOU Yi-xian;LI Ling;ZHU Li

作者机构：南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室广东广州510515 南方医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2019年第14卷第4期

页      面：401-405页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：广东省医学科研基金项目(No.A2016357) 广东省自然科学基金项目(No.2018A030313767) 

主　　题：可诱导表达 载脂蛋白L1 慢病毒 细胞系构建 

摘      要：目的利用Cumate系统实现APOL1基因在293T细胞内的可诱导稳定表达。方法通过查询NCBI数据库,设计APOL1基因编码区全长引物,克隆至Cumate慢病毒质粒。嘌呤霉素筛选包装慢病毒感染的293T细胞,阳性细胞扩大培养后用不同浓度的Cumate诱导表达,利用Real-time PCR和Western blot验证APOL1的表达情况。结果构建的293T细胞系可被Cumate诱导表达APOL1,且不同浓度的Cumate对细胞表达载脂蛋白L1有不同的影响。Real-time PCR和Western blot均证明在诱导48 h后,随着诱导剂浓度的增加,APOL1表达增多,在Cumate为50μg/ml时APOL1达到最高值。结论成功构建了可诱导表达APOL1基因的293T细胞系,为研究APOL1在EV71感染人体细胞过程中的作用机制提供了稳定的实验材料。