MPST基因慢病毒载体的构建及在SH-SY5Y细胞中的表达

作     者：范海琼 孙达权 柳香香 王念 徐国强 潘际刚 Fan Haiqiong;Sun Daquan;Liu Xiangxiang;Wang Nian;Xu Guoqiang;Pan Jigang

作者机构：贵州医科大学基础医学院生理学教研室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵阳550025 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2019年第38卷第4期

页      面：1812-1816页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：贵州省科技厅科学技术基金(黔科合J字2267号) 贵州省科技厅贵阳医学院联合基金(黔科合LG字018号) 贵阳市科技计划项目(筑科合同38号)共同资助 

主　　题：慢病毒 MPST 过表达 SH-SY5Y细胞 硫化氢 

摘      要：为构建MPST基因慢病毒表达载体,获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株,本研究通过PCR扩增出MPST目的基因,将其克隆到慢病毒表达载体p EB-GFP (T2A) PURO上,将重组慢病毒表达载体和慢病毒包装质粒系统(pLP/VSVG, pLP1, p LP2)共转染293T细胞,用获得重组的慢病毒液感染SH-SY5Y细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达MPST基因的(SH-MPST)细胞株。采用Real-time PCR和Western blotting以及ELISA等方法对筛出来的SH-MPST中的MPST的表达及功能进行鉴定。与空转染组(SH-PEB)相比,SH-MPST细胞中MPST mRNA及蛋白的表达水平显著增加,且细胞内MPST酶活性、酶含量及细胞释放硫化氢的水平均显著增加(p0.05)。以上研究表明,MPST基因慢病毒表达载体成功构建,并获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株,这将为MPST功能的深入研究提供依据。