含有纯化标签的重组人表皮生长因子的构建及表达

作     者：熊盛 陈宇霞 钱垂文 黄立 张美英 黄文韬 王一飞 Xiong Sheng;Cheng Yu-xia;Qian Chui-wen;Huang Li;Zhang Mei-ying;Huang Wen-tao;Wang Yi-fei

作者机构：暨南大学药学院制药工程教研室广州510630 暨南大学生物医药研究开发基地广州510630 中科院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所2004级研究生上海200031 

出 版 物：《中国卫生检验杂志》 (Chinese Journal of Health Laboratory Technology)

年 卷 期：2006年第16卷第10期

页      面：1153-1155,1174页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(30400071) 广东省自然科学基金团队项目(2004E039213) 

主　　题：人表皮生长因子 纯化标签 镍离子螯和亲和层析 Hela细胞 

摘      要：目的:高效表达和制备有活性的人表皮生长因子(hum an ep iderm al growth factor,hEGF)。方法:用DNA重组技术构建EGF基因并插入表达载体pQE-40,与载体上的6×H is标签融合,获得的表达质粒pQE-EGF转化***15[pREP4],得工程菌M15[pQE-EGF]。MTT法测定活性,培养工程菌M15[pQE-EGF]并诱导目的蛋白表达,镍离子螯合亲和层析纯化重组EGF。结果:所构建的EGF序列正确,重组EGF在大肠杆菌中以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的21.2%,经镍离子亲和层析一步纯化后的重组EGF纯度达90%,得率为94%。复性后的重组EGF具有促Hela细胞生长活性。结论:以***15[pREP4]/pQE-40系统表达EGF具有技术路线简单、目的蛋白得率高、成本低等优点,是一种制备活性hEGF的有效手段。