人4IgB7-H3-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究

作     者：马震宇 周迎会 陈永井 费敏 马珍妮 王勤 王雪峰 马泓冰 谢芳 张学光 MA Zhen-yu;ZHOU Ying-hui;CHEN Yong-jing;FEI Min;MA Zhen-ni;WANG Qin;WANG Xue-feng;MA Hong-bing;XIE Fang;ZHANG Xue-guang

作者机构：苏州大学生化工程研究所苏州215007 苏州大学医学生物技术研究所 

出 版 物：《现代免疫学》 (Current Immunology)

年 卷 期：2007年第27卷第2期

页      面：109-114页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金重点资目项目(30330540) 国防科工委预研资目项目(A3820060130) 

主　　题：4IgB7-H3 RT-PCR基因转染 融合蛋白 共刺激 

摘      要：为获得人4IgB7-H3-Fc融合蛋白,研究其对T细胞的共刺激作用,采用PCR技术分别从pMD18-T/4IgB7-H3和pMD18-T/hIgG1(Fc)重组载体中扩增出人4IgB7-H3胞外段基因和人IgG1重链Fc恒定区基因,通过RT-PCR技术插入逆转录病毒载体pGEZ-Term,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体经脂质体法共转染包装细胞293T,收集含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清反复感染L929细胞,利用Zeocin筛选获得能稳定分泌4IgB7-H3-Fc融合蛋白的基因转染细胞。基因转染细胞经无血清培养后,收集的上清用Dot blot检测,超滤浓缩并经Protein G柱纯化,再用SDS-PAGE、Western blot鉴定。以4IgB7-H3-Fc蛋白检测活化T细胞表面未知受体的表达,通过MTT方法分析4IgB7-H3-Fc融合蛋白对T细胞的共刺激作用。结果显示,成功地构建了pEGZ-Term/4IgB7-H3-Fc重组逆转录病毒载体,经转染包装细胞293T后,筛选获得能稳定分泌4IgB7-H3-Fc蛋白的L929基因转染细胞株;纯化后的4IgB7-H3-Fc蛋白能够与活化T细胞表面结合,并对T细胞有显著的促增殖作用。为探讨人4IgB7-H3-Fc融合蛋白对T细胞的共刺激作用和寻找其未知受体奠定良好的物质基础。